Ze magik of Western Blotting
Western Blotting er kort fortalt en teknikk for detektering av spesifikke proteiner i en prøve (f.eks et celleekstrakt - et celleekstrakt er sånn ca en løsning av innholdet i mange celler). Proteinene i prøven separeres først ved hjelp av en porøs gel (her som i meningen en gel med porer - konsistensen er som gele:-)) og en elektrisk strøm. Proteinene separeres etter størrelse, og hvis man er smart - og det er man jo - har man kjørt en standard (en farget løsning med proteiner av kjente størrelser) sammen med prøven slik at man får et visuelt mål på størrelsen til proteinene i prøven. Proteinene - som nå befinner seg inni gelen - overføres så til en membran, igjen ved hjelp av en elektrisk strøm. Membranen inkuberes først med fettfri melk for å unngå uspesifikk binding av antistoffet, så med det primære antistoffet - som er laget slik at det binder til proteinet man er interessert i, og til slutt med det sekundære antistoffet. Det sekundære antistoffet binder til det primære antistoffet og reagerer i tillegg med det som kalles signalblandingen slik at man kan ta fine bilder av proteinet man er interessert i.
Western Blotting brukes f.eks til å
Western Blotting er kort fortalt en teknikk for detektering av spesifikke proteiner i en prøve (f.eks et celleekstrakt - et celleekstrakt er sånn ca en løsning av innholdet i mange celler). Proteinene i prøven separeres først ved hjelp av en porøs gel (her som i meningen en gel med porer - konsistensen er som gele:-)) og en elektrisk strøm. Proteinene separeres etter størrelse, og hvis man er smart - og det er man jo - har man kjørt en standard (en farget løsning med proteiner av kjente størrelser) sammen med prøven slik at man får et visuelt mål på størrelsen til proteinene i prøven. Proteinene - som nå befinner seg inni gelen - overføres så til en membran, igjen ved hjelp av en elektrisk strøm. Membranen inkuberes først med fettfri melk for å unngå uspesifikk binding av antistoffet, så med det primære antistoffet - som er laget slik at det binder til proteinet man er interessert i, og til slutt med det sekundære antistoffet. Det sekundære antistoffet binder til det primære antistoffet og reagerer i tillegg med det som kalles signalblandingen slik at man kan ta fine bilder av proteinet man er interessert i.
Western Blotting brukes f.eks til å
- vise at en spesifikk cellelinje produserer/ikke produserer et bestemt protein
- vise at forskjellige cellelinjer produserer forskjellige mengder av et bestemt protein
- vise at behandling av celler med forskjellige ting (cellegift, signalstoffer ol.) fører til en økt/minket produksjon av et bestemt protein
